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液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時測定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時測定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素

摘要 建立了食品中甲基香蘭素和乙基香蘭素的高效液相色譜-單四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。該方法樣品經(jīng)酸沉蛋白后,以SB-C18柱(2.1×50 mm, 3.5μm)分離，流動相為甲醇和水(33:67，V/V)，電噴霧負(fù)離子MRM模式檢測。該方法的檢出限0.1mg/kg，線性范圍0.01-1.0μg/mL，加標(biāo)回收率80.0%～84.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.55%和1.81%。

關(guān)鍵詞 液質(zhì)聯(lián)用儀，嬰幼兒配方奶粉，甲基香蘭素，乙基香蘭素

0 前言

香蘭素是重要的食品添加劑,其被廣泛用作糖果、餅干、糕點(diǎn)、飲料等食品的增香劑 。香蘭素主要包括甲基香蘭素和乙基香蘭素。最近，衛(wèi)生部公布《食品用香料、香精使用原則(征求意見稿)》，明確把純?nèi)榈?0種食品列為禁加食用香料香精范圍，其中嬰兒配方食品、較大嬰兒和幼兒配方食品也擬被“禁香”，而香蘭素是嬰幼兒配方奶粉經(jīng)常添加的增香劑，但是還沒有國標(biāo)方法，因此,建立靈敏、準(zhǔn)確、快速的嬰幼兒配方奶粉中香蘭素檢測方法,為執(zhí)法提供技術(shù)鑒定依據(jù),是當(dāng)務(wù)之急。

目前,國內(nèi)外測定香蘭素的方法主要有光度法、高效液相色譜法、電化學(xué)法等[1][2]，這些方法只能定量，不能準(zhǔn)確定性，可能會造成假陽性的測定結(jié)果。本文將樣品經(jīng)酸沉蛋白后,通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量測定,獲得較滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器，試劑，樣品

1.1.1 儀器

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀： LC7000型液相色譜儀(海能儀器公司，中國);配ExpressionCMS型單四極桿質(zhì)譜(Advion公司，美國); Milli-Q去離子水發(fā)生器(Milli-Q公司，美國)。

1.1.2 試劑

乙腈：色譜純。

冰醋酸、鹽酸、氫氧化鈉：北京化工廠。以上均為分析純。

甲基香蘭素和乙基香蘭素：北京化學(xué)試劑公司。

1.1.3樣品

嬰幼兒配方奶粉購自本地超市。

1.2 分析條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱：3.5 μm，2.1mm×50mm;流速：0.25 mL/min;柱溫：35℃;進(jìn)樣量：10μL;流動相：甲醇+水(33：67，V/V)。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源(ESI);掃描方式：負(fù)離子掃描;檢測方式：多反應(yīng)檢測;干燥氣：N2 ;霧化氣壓力：275.8 kpa;干燥氣溫度：340 ℃;干燥氣流速：8 L/min。甲基香蘭素和乙基香蘭素質(zhì)譜分析的條件參數(shù)如下表1：

1.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取5.0 g樣品，用25.0 mL 50℃熱水溶解，超聲10min，用5 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.7，放置2 min后，再用2.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值至4.5。將樣品溶液移至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性濾紙自然過濾，棄去最初濾液，在50 mL錐形瓶中收集濾液，濾液過0.20µm濾膜后，供液相色譜-單四級桿質(zhì)譜儀分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

嬰兒配方奶粉中蛋白質(zhì)含量較高，因此，本方法先用50℃熱水超聲提取，再經(jīng)酸沉蛋白后直接用測定。實(shí)驗(yàn)證明，該法操作簡單，易于推廣，加標(biāo)回收率大于80.0%，可以滿足嬰兒配方奶粉中的香蘭素日常檢測要求。

2.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

采用直接進(jìn)樣方式分別將濃度為100 ng/mL的甲基香蘭素和乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入離子源中，在負(fù)離子檢測方式下進(jìn)行母離子全掃描，得到甲基香蘭素和乙基香蘭素的準(zhǔn)分子離子峰。再對得到的甲基香蘭素和乙基香蘭素的質(zhì)譜參數(shù)破碎電壓進(jìn)行優(yōu)化，使甲基香蘭素和乙基香蘭素的定性離子與定量離子產(chǎn)生的離子對強(qiáng)度比例達(dá)到最大時為最佳，得到甲基香蘭素和乙基香蘭素的最佳質(zhì)譜參數(shù)(如表1所示)。

2.3 色譜條件的優(yōu)化

　　甲基香蘭素和乙基香蘭素屬于中等極性化合物，為了有利于色譜峰的分離及鋒形的改善，本方法分別采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱、ZORBAX Eclipse SB-C18和ZORBAX SB-Aq柱進(jìn)行分離試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)SB-C18柱，采用甲醇-水(33：67，V/V)為流動相進(jìn)行梯度洗脫分離效果較好。0-3 min主要是洗脫樣品測定液中極性較強(qiáng)的雜質(zhì);3-9min主要是洗脫樣品測定液中目標(biāo)化合物。圖1為加標(biāo)樣品總離子流圖，從圖中可以看出甲基香蘭素和乙基香蘭素得到較好的分離。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍和方法檢測限

將逐級稀釋的標(biāo)準(zhǔn)工作液分別進(jìn)樣5μL，測定結(jié)果經(jīng)線性回歸，線性范圍、回歸方程(y為峰面積，Counts;x為濃度，ug.L-1)相關(guān)系數(shù)和檢出限見表2。

注：進(jìn)空白樣,以基線3倍噪聲值在標(biāo)準(zhǔn)曲線查得結(jié)果計(jì)算, 按測定方法計(jì)算,得到方法檢出限。

2.3 方法的回收率和精密度

稱取空白樣品6份,每份5.0 g, 分別添加成濃度為0.1mg/kg 或1.0 mg/kg的待測樣品,按供試品制備方法制備后,進(jìn)行測定, 結(jié)果見表3。從表3中的回收率及精密度數(shù)據(jù)可以看出，甲基香蘭素和乙基香蘭素的加標(biāo)回收率在80.0%～84.1%之間，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.55%和1.81%(n=8)，滿足試驗(yàn)要求。

3 結(jié)論

建立了嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素的高效液相色譜質(zhì)譜測定方法。該法樣品經(jīng)酸沉蛋白后，樣品提取液經(jīng)C18反相色譜柱進(jìn)行有效分離，電噴霧離子化，單四級桿質(zhì)譜檢測。甲基香蘭素和乙基香蘭素的品加標(biāo)回收率80.0%-84.1%,平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.55%和1.81%(n=8), 適用于嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素的快速測定。