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高效液相色譜法測定辣椒紅素

　　摘要：采用超聲波輔助丙酮提取辣椒中的辣椒紅素，高效液相色譜法進行測定。色譜條件為色譜柱：4.6×250mm，5um;流動相：甲醇—二氯甲烷;流速：1ml/min;檢測波長：474nm;柱溫：30℃;進樣量：10μl。結(jié)果表明，峰面積與待測物濃度呈良好的線性關系。

　　關鍵詞：辣椒紅素;高效液相色譜;測定

　　辣椒富含辣椒堿、二氫辣椒堿、辣椒紅素、辣椒玉紅素、β-胡蘿卜素、碳水化合物、維生素C以及鈣、磷等等。其中辣椒堿和二氫辣椒堿是辣椒中的辛辣成分，具有生理活性和持久的消炎鎮(zhèn)痛作用，內(nèi)服可以促進胃液分泌，增進食欲，緩解胃腸脹氣，改善消化功能和促進血液循環(huán);外用可以用作治療牙痛，肌肉痛，風濕病和皮膚病等疾病，對治療神經(jīng)痛有顯著療效。辣椒紅素、辣椒玉紅素已被美國FAO、英國、日本、EEC、WHO等組織審定為無限性使用的天然食品添加劑，其國際市場十分緊俏。目前，美國、德國、日本、韓國等國家對辣椒堿、辣椒紅素的提取技術及應用開發(fā)研究已形成國際科技界的研究熱點。

　　1 材料與方法

　　1.1 主要材料與試劑干紅辣椒，辣椒紅素標樣，純度93.3 %;甲醇(色譜級)，丙酮(分析級)，二氯甲烷(分析級)，

　　1.2 主要儀器與設備

　　LC7000型高效液相色譜儀(包括LC7011泵，LC7050自動進樣器，LC7031注溫箱LC7060二極管陣列檢測器，色譜柱C18(250 ×4.6 mm，5μm))，Sine Sonic 150型超聲波洗凈機，TDL-40B型離心機，BS210S型賽多利斯電子分析天平，0.45 μm微孔濾膜。

　　1.3 試驗方法

　　1.3.1 色譜條件

　　色譜柱：Inertsil OD-3，4.6×250mm，5μm，不銹鋼柱;流動相：A-甲醇，B-二氯甲烷;流速為1ml/min;進樣量：10μl;室溫：(28±2)℃;色譜柱溫度：30℃;檢測波長：474nm，以峰面積外標法定量。

　　1.3.2 系統(tǒng)適用性試驗

　　(1)檢測波長的確定。稱取一定量的辣椒紅素標準品，用丙酮溶解后，配制成濃度為0.1mg/ml的標準品溶液，通過HPLC的紫外檢測器掃描得出辣椒紅素的最大吸收波長。

　　(2)標準曲線的繪制。將辣椒紅素標準品5mg倒于10ml容量瓶中，加入丙酮至刻度，搖勻。逐級稀釋，分別配置成濃度為0.002 mg/ml，0.004 mg/ml，0.010 mg/ml，0.020 mg/ml，0.030 mg/ml，0.050 mg/ml，0.060 mg/ml，0.070 mg/ml，0.080 mg/ml，0.090 mg/ml，0.100 mg/ml，0.150 mg/ml，0.200 mg/ml的溶液，吸取10μl，上機檢測。根據(jù)標樣的濃度與峰面積在Lcsolution工作站中得到標準曲線、回歸方程、線性范圍及相關系數(shù)繪制標準曲線。

　　(3)精密度試驗。取任意一樣品，連續(xù)5次進樣，并對其進行面積積分。本試驗為了有針對性地考察，采用辣椒紅素標準品作為研究對象，分別吸取濃度為0.1mg/ml的辣椒紅素標準品溶液2μl，統(tǒng)計峰面積并計算相對標準偏差RSD%。用于評價儀器的可靠性。

　　(4)重復性試驗。稱取5份同一批樣品0.2g，分別加入5 ml丙酮，超聲波提取三次，3500r/m的情況下離心10min，收集提取液，定容到25ml，13000r/m的情況下離心20min，上機檢測。統(tǒng)計峰面積并計算相對標準偏差RSD%。用于評價方法的可靠性。

　　(5)加樣回收率試驗。根據(jù)參考文獻，分別稱取同一批樣品0.2g，共稱取6次，分別加入4ml丙酮，2個為一組平行，分別精密加入濃度為0.5mg/ml辣椒紅素標準溶液100μl，100μl，120μl，120μl，150μl，150μl。進行HPLC方法測定。回收率試驗用于評價測定方法的準確性。

　　1.3.3 辣椒素與二氫辣椒素的超聲波輔助提取將樣品在30 ℃恒溫凍干后粉碎成粉末，處理后稱取0.5 g粉末樣品，加入一定量的丙酮，渦旋振蕩后在超聲波150 W，超聲時間25min，超聲溫度35℃，3500 r/min條件下離心10 min，將提取液倒入25 ml容量瓶中，連續(xù)提取3次[8]，收集提取液，丙酮定容，搖勻后，溶液過0.45 μm微孔濾膜，濾液取10 μl上機測定。

　　2 結(jié)果與討論

　　2.1 系統(tǒng)適應性試驗

　　2.1.1 HPLC檢測波長的確定

　　在辣椒紅素最大吸收值處，得到它的光譜圖，如圖1。由圖1可以看到辣椒紅素的最大吸收波長為474mm。

　　從表1的結(jié)果可見，用HPLC法測定辣椒中辣椒紅素含量，RSD為0.24%，表明該儀器的精密度良好，測定結(jié)果較滿意。

　　2.1.6 重復性試驗結(jié)果

　　取同一批樣品5份，按照測定方法測定，結(jié)果見表2。

　　從表2結(jié)果可見，用HPLC法測定辣椒中辣椒紅素含量，RSD為0.20%，表明此方法的重復性好，測定結(jié)果較滿意。

　　2.1.7 加樣回收試驗結(jié)果

　　分別稱取同一批樣品0.2g，共稱取6次，分別加入 4ml丙酮，2個為一組平行，加入不同量的辣椒紅素標準品。根據(jù)公式計算加樣回收率。結(jié)果見表3。

　　由回收率試驗結(jié)果證明，以辣椒紅素為標準品，利用丙酮為提取劑，超聲波測定辣椒中辣椒紅素含量符合分析要求，證明了辣椒紅素的提取分析中此方法的可行性及準確度高。

　　3 結(jié)論

　　(1)本研究結(jié)果顯示，提取劑為丙酮，固液比1：20，超聲時間25min，超聲溫度35℃，辣椒紅素得率為0.103%。

　　(2)HPLC測定辣椒紅素的最佳條件是：色譜柱：Inertsil OD-3，4.6×250mm，5μm，不銹鋼柱;流動相：A-甲醇，B-二氯甲烷;流速為1ml/min;進樣量：10μl;室溫：(28±2)℃;色譜柱溫度：30℃;檢測波長：474mm，以峰面積外標法定量。

　　(3)從天然農(nóng)作物中提取有效成分是今后食品工業(yè)的發(fā)展趨勢，開發(fā)純天然、低毒害、無污染的活性成分是目前研究的熱點之一。辣椒紅素是純天然的食品添加劑，有很好的應用前景。

　　參考文獻

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高效液相色譜法測定辣椒紅素

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