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凱氏定氮法測定蒙牛酸奶中蛋白質(zhì)含量

凱氏定氮法測定蒙牛酸奶中蛋白質(zhì)含量

　　摘要：本文主要介紹了凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量的原理，并采用Hanon k1100全自動凱氏定氮儀測定了市售3種蒙牛酸奶中的蛋白質(zhì)含量。

　　關(guān)鍵詞：凱氏定氮法;蒙牛酸奶;蛋白質(zhì)

　　凱氏定氮法是測定蛋白質(zhì)最經(jīng)典，也是最常用的方法，樣品在加速劑(硫酸銅(催化劑);硫酸鉀(提高沸點))的參與下，加入濃硫酸進(jìn)行消解時，各種含氮有機化合物，經(jīng)過復(fù)雜的高溫分解反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為銨態(tài)氮，堿化后蒸餾出來的氨用硼酸吸收，以酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，最后計算出蛋白質(zhì)的含量。

　　1. 材料與方法

　　1.1 儀器

　　Hanon K1100凱氏定氮儀(濟南海能儀器有限公司);Hanon SH220石墨消解儀(濟南海能儀器有限公司，可同時消解20個);分析天平(上海精科儀器);消化管(濟南海能儀器有限公司，與消解儀、定氮儀配套);烘箱

　　1.2 主要試劑

　　濃硫酸(18.4g/ml，AR);硫酸銅，AR;硫酸鉀，AR;硼酸(20g/L，按混合指示劑：硼酸=1:100加入指示劑);40%氫氧化鈉溶液;混合指示劑(1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合);蒸餾水;硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液[C(1/2H2SO4)=0.1037mol/L]。

　　1.3 方法

　　1.3.1 消化

　　采用減量法準(zhǔn)確稱取1g(精確至0.0001g)酸奶樣品(注意不要掛壁)，加入0.2g硫酸銅，3.0g硫酸鉀，再加入8.5ml濃硫酸，搖勻(3種酸奶各做6個平行)。將消化管置于Hanon SH220石墨消解爐上，先設(shè)定200℃，加熱30min，再設(shè)定300℃，加熱30min再將溫度調(diào)制380℃，加熱30min，此時消解液變綠，再調(diào)至420℃消解30min，冷卻，待蒸餾(同時做兩個空白試驗)。

　　1.3.2 蛋白質(zhì)含量的測定

　　將冷卻后的消化管置于Hanon K1100全自動凱氏定氮儀上進(jìn)行測定。先檢查定氮儀，確認(rèn)冷凝水已經(jīng)打開，按照儀器提示設(shè)定好參數(shù)，稀釋水10ml、硼酸20ml、加堿40ml、蒸餾5min，蒸餾完成后儀器進(jìn)行自動滴定并計算打印樣品的含氮量以及蛋白質(zhì)含量。

　　2. 結(jié)果與討論

　　2.1 蒙牛紅棗酸奶的蛋白質(zhì)含量

　　2.2 蒙牛木糖醇酸奶蛋白質(zhì)含量

　　2.3 蒙牛雙株酸奶蛋白質(zhì)含量

　　通過以上三種酸奶的測定結(jié)果可以看出，采用Hanon k1100自全動凱氏定氮儀測得的結(jié)果平行性較好，絕對相差及相對平均偏差都在允許范圍之內(nèi)，測得的蛋白質(zhì)含量與包裝標(biāo)注的基本一致，且操作簡便，省時省力，極大提高實驗速度。