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高效液相色譜法測(cè)定煙草中煙堿含量

高效液相色譜法測(cè)定煙草中煙堿含量

　　摘要：建立一種高效液相色譜法測(cè)定煙草中煙堿的含量。

　　方法:色譜柱C18 (250mmX 4.6 mm，5.0um)，流動(dòng)相為甲醇：0.02 mol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH 6.0)=70：30;檢測(cè)波長259 nm;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量20 uL;柱溫30℃ 。

　　結(jié)果:溶液濃度在27.568~165.408 mg/L時(shí)峰面積與煙堿濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為0.999 0，方法的檢測(cè)限(s/n=3)為0.011 mg/L，平均回收率為97.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(兄 )為1.1%(n=5)。

　　結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為煙草中煙堿含量的檢測(cè)方法。

　　關(guān)鍵詞：HPLC：煙草;煙堿;含量

　　煙草中含有多種生物堿，其中煙堿(又名尼古丁Nicotine，簡(jiǎn)稱NTC)含量最高，約占煙草生物堿總量的95%。其化學(xué)名稱為1一甲基一2一(2一吡啶基)吡咯烷。煙堿含量的高低不僅關(guān)系到煙草制品的質(zhì)量，而且關(guān)系到人體健康。所以，選擇快速準(zhǔn)確測(cè)量煙堿含量的方法具有重要意義。

　　目前測(cè)定煙草中煙堿含量的方法很多，包括有高效液相色譜法 、重量分析法[51、分光光度法I6]以及連續(xù)流動(dòng)法同等。其中重量分析方法操作繁鎖、耗時(shí)。分光光度法可測(cè)量的濃度范圍小，且需要蒸餾或萃取等復(fù)雜的前處理，易受外界條件影響。目前煙草行業(yè)采用連續(xù)流動(dòng)法測(cè)定煙草中的煙堿，采用的儀器昂貴，試劑劇毒，對(duì)人體不安全。采用高效液相色譜法對(duì)煙草中的煙堿含量進(jìn)行測(cè)定，該方法既能將煙堿與共存生物堿等組份分開，又能準(zhǔn)確快速得到分析結(jié)果，同時(shí)與連續(xù)流動(dòng)法的測(cè)定結(jié)果相比，無明顯差異。

　　1 材料與方法

　　1.1 儀器和試劑 ‘

　　儀器：LC7000高效液相色譜儀，LC7020紫外/可見檢測(cè)器，色譜柱 C 18(250.0 mm×4.6 mm，5.0 m)，空氣浴振蕩器

　　試劑：煙堿標(biāo)準(zhǔn)品，甲醇(色譜純)，磷酸(分析純)、磷酸氫二鈉(分析純)，

　　二次蒸餾水，煙草樣品1、2、3號(hào)

　　1.2 色譜條件

　　流動(dòng)相為甲醇：0.02 mol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH 6.0)=70：30;檢測(cè)波長259 nm;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量20uL;柱溫30℃。

　　1。3 樣品的處理

　　稱取過100目篩煙草樣品0.1 g，置于25 mL容量瓶中，加15 mL甲醇，25℃下空氣浴振蕩2 h后定容，靜置分層后取上清液進(jìn)行色譜分析。

　　1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

　　精密稱量煙堿標(biāo)準(zhǔn)品0.689 2 g置于500 mL容量瓶中，用甲醇溶解，稀釋至刻度，即得。

　　2 結(jié)果與分析

　　2_1 標(biāo)樣和樣品色譜

　　按照“1.2”下色譜條件測(cè)定煙堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液，煙堿標(biāo)樣和樣品色譜見圖1和2。由圖l、2可知，煙堿色譜峰與雜質(zhì)峰分離較好，保留時(shí)間較適宜。

　　2.2 精密度

　　在上述色譜條件下對(duì)同一待測(cè)樣品進(jìn)行5次重復(fù)測(cè)定，其RSD為1.1%，表明方法精密度良好。

　　2.3 回收率

　　采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在已知煙堿含量的3批樣品中加人煙堿標(biāo)準(zhǔn)品。按照“1.2”下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。由表1可知，平均回收率為97.9%。

　　2.4 線性關(guān)系

　　分別精密吸取“1.4” 下標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3,0 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度后搖勻。

　　按“1.2”下色譜條件分別測(cè)定，得到煙堿測(cè)定工作曲線的線性方程及相關(guān)系數(shù)。以煙堿濃度為橫坐標(biāo) ，峰面積為縱坐標(biāo)y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為Y=0.379 9X一3.775 9，r=0.999 0，表明在27.568～165.408 mg/L時(shí)，峰面積與煙堿濃度呈良好的線性關(guān)系。

　　2.5 方法定量限與檢測(cè)限

　　對(duì)27.568 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測(cè)定，方法的定量限(S/n=10)為0.28 mg/L，檢測(cè)限(S/n=3)為0.01 1 mg/L。

　　2.6 樣品含量

　　取樣品按照“1.3”下方法處理后，按“1_2”下色譜條件測(cè)定煙堿含量，結(jié)果見表2。由表2可知，連續(xù)流動(dòng)學(xué)與HPLC法測(cè)定結(jié)果無明顯差異。

　　3 結(jié)論與討論

　　(1)采用該方法測(cè)定煙草中煙堿含量，精密度符合要求，平均回收率為97.9%，溶液濃度在27.568～165.408 mg/L時(shí)峰面積與煙堿濃度呈良好的線性關(guān)系。方法的檢測(cè)限為O.01 1 mg/L，定量限為0.28 mg/L。操作快速簡(jiǎn)便，樣品處理簡(jiǎn)單，可作為煙草中煙堿含量的檢測(cè)方法。

　　(2)采用

　　連續(xù)流動(dòng)法對(duì)同3批樣品進(jìn)行煙堿含量的檢測(cè)，結(jié)果表明，連續(xù)流動(dòng)學(xué)與HPLC法測(cè)定結(jié)果無明顯差異.