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高效液相色譜法測定阿奇霉素干混懸劑含量

高效液相色譜法測定阿奇霉素干混懸劑含量

　　摘要 目的：建立高效液相色譜法測定阿奇霉素干混懸劑含量。方法：采用Xbridge C18柱(150mm×2.1mm，5μm)，以0.025mol·L-1 的磷酸氫二鈉(pH 9.0)-乙腈(45：55)為流動相，流速為0.35mL·min-1，柱溫為30℃，檢測長為215nm。結(jié)果：線性范圍為467.70-1434.51µg·mL-1，r =0.999758，平均回收率(n=15)為99.9%(RSD=1.1%);本方法重復(fù)性和精密度良好(RSD<2.0%)。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于阿奇霉素干混懸劑的含量測定。

　　關(guān)鍵詞：阿奇霉素干混懸劑;高效液相色譜法;含量測定

　　Determination of azithromycin for suspension by HPLC

　　Abstract Objective To establish a high-performance liquid chromatography(HPLC) method for quantitative determination of Azithromycin for suspension.Methods:The column was Waters Xbridge C18(150mm×2.1mm,5μm).The mobile phase composed of 0.025 mol·L-1 Na2HP04(pH9.0)-acetonitrile(45：55).The flow rate was 0.35 mL·min-1 , and the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 215nm. Results: The linear relationship of azithromycin was good in the range of 467.70-1434.51µg·mL-1,The average recovery(n=15) was 99.9% and RSD(n=15) was 1.1%;RSD of repeated experiment(n=15) was 0.6%;The repeatability and precision of the method were good (RSD<2.0%).Conclusion:This method is simple and believable with good repeatability.It can be effectively used for the quality control of azithromycin for suspension.

　　Key words:Azithromycin for suspension;HPLC;Quantitative Determination

　　阿奇霉素(azithromycin)是一種15元氮環(huán)內(nèi)酯類抗生素[1]，其抗菌譜與紅霉素相似但抗菌作用更強,突出的優(yōu)點是對堿穩(wěn)定，半衰期長，有較高的生物利用度[2]，因此具有服藥方便，療程短，用藥量少，療效肯定等優(yōu)點，其制劑阿奇霉素干混懸劑在國內(nèi)外臨床已廣泛使用，本文參考有關(guān)文獻[4]、[5]、[6]，采用高效液相色譜法測定其含量，方法簡便準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為阿奇霉素干混懸劑含量測定的方法之一。

　　1 儀器與試劑

　　海能LC7000液相色譜儀(LC7011 泵及LC7050自動進樣器，LC7020紫外檢測器);;梅特勒 XS105電子天平;色譜柱 Xbridge C18柱(150mm×2.1mm，5μm)。

　　阿奇霉素工作對照品(含量946μg·mg-1，批號：0601，齊魯制藥有限公司);阿奇霉素雜質(zhì)A工作對照品(含量95.4%，批號：aza060801，齊魯制藥有限公司);阿奇霉素干混懸劑(規(guī)格為100mg，批號：063070521、063070301、063070302，齊魯制藥有限公司);乙睛為色譜純，美國moker公司產(chǎn)品;水為純化水;其余試劑均為分析純。

　　2 色譜條件

　　色譜柱：Waters XbridgeC18柱(150mm×2.1mm，5μm);流動相：0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉(pH 9.0)-乙腈(45：55);流速：0.35mL·min-1;柱溫：30℃;檢測波長：215nm;進樣體積：20μL。

　　3 溶液制備

　　3.1 對照品溶液的制備 精密稱定阿奇霉素對照品25mg和阿奇霉素雜質(zhì)A對照品5mg，置同一25mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

　　3.2 供試品溶液的制備 取阿奇霉素干混懸劑，求出平均裝量，將裝量差異項下的內(nèi)容物混勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿奇霉素25mg)，置25mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

　　4 系統(tǒng)適用性試驗

　　按上述色譜條件,進樣對照品溶液20μL，結(jié)果理論塔板數(shù)按阿奇霉素峰計算不小于1500;阿奇霉素峰與阿奇霉素雜質(zhì)A峰分離度大于5.0;阿奇霉素峰的托尾因子不大于2.0，對照品溶液重復(fù)進樣主峰面積的RSD<2.0%(n=5)

　　5 線性關(guān)系試驗

　　按對照品溶液阿奇霉素濃度的50-150%制定5個不同濃度梯度，分別是50%、80%、100%、120%、150%，每個濃度梯度平行制備3份樣品溶液，共15份樣品溶液，每份樣品都加入處方量輔料，用流動相溶解并定量稀釋制成規(guī)定濃度，即得系列供試品溶液。按上述色譜條件，分別進樣20μL，記錄阿奇霉素峰面積，以濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的阿奇霉素峰面積為縱坐標(biāo)進行回歸，得回歸方程：Y=3.21e+003X - 5.36e+004 r=0.999758

　　結(jié)果表明：在467.70-1434.51µg·mL-1范圍內(nèi)，阿奇霉素濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

　　6 回收率試驗

　　溶液制備同線性關(guān)系試驗供試品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計算供試品中阿奇霉素(C38H72N2O12)的含量，根據(jù)含量結(jié)果計算回收率，結(jié)果5種濃度回收率(n=3)分別為99.2%( RSD=0.5%),98.6%( RSD=0.9%),100.0%( RSD=0.3%), 101.2%( RSD=0.7%),100.7%( RSD=0.3%);平均回收率(n=15)為99.9%( RSD=1.1%)。說明此方法得到的測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

　　7 精密度試驗

　　7.1 重復(fù)性 取同一批(063070521)阿奇霉素干混懸劑，按“3”項下方法制備所需溶液，平行測定6次的含量結(jié)果，RSD值為0.8%。

　　7.2 中間精密度 取3批阿奇霉素干混懸劑，在不同時間，由不同的化驗員，按“3”項下方法制備所需溶液分別測定，二人測定的同批含量結(jié)果的相對平均偏差

　　063070521為0.8%，063070301為0.6%，063070302為1.6%。

　　8 穩(wěn)定性試驗

　　按“3”項下配制對照品溶液和樣品溶液(批號：063070521)，每間隔1小時，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復(fù)進樣13次，量取主峰面積，計算幾次進樣結(jié)果峰面積的RSD值。對照品溶液RSD為0.9%，樣品溶液RSD為0.8%，表明對照品溶液和樣品溶液至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。

　　9 樣品測定

　　取3批阿奇霉素干混懸劑，按“3”項下配制對照品溶液和樣品溶液，在上述色譜條件下分別進樣20μL，按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果與抗生素微生物法比較見下表

　　從表結(jié)果可看出本法與藥典采用的抗生素微生物效價法測定阿奇霉素干混懸劑的含量無顯著性差異。

　　10 討論

　　10.1 本文參考有關(guān)文獻[4]，對流動相的組成進行了探討，發(fā)現(xiàn)采用本文的流動相即0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉(pH 9.0)-乙腈(45：55)，峰形穩(wěn)定，分離較好。

　　10.2 溶劑的選擇 由于阿奇霉素干混懸劑的輔料較多，故溶劑選擇比較困難。本法采用流動相和乙腈試驗對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)均可溶樣，但因純乙腈毒性較大且價格較貴，故最后溶劑定為流動相。

　　10.3 樣品濃度選擇 采用阿奇霉素濃度為1mg·mL-1時峰形對稱，和相鄰雜質(zhì)峰分離較好;濃度過大，峰拖尾嚴(yán)重且輔料量大而不好過濾;濃度過小，準(zhǔn)確度受影響。

　　10.4 干擾試驗 將溶劑和按處方工藝配制不含阿奇霉素的空白輔料，按“3”項下方法制備空白供試液，記錄色譜圖，結(jié)果顯示空白溶劑和空白輔料對本法測定無干擾。

　　10.5 測定條件流動相的流速±0.05ml，柱溫度±5℃，乙腈相比例±5%，緩沖鹽pH±0.4等進行小的變動，系統(tǒng)適用性均能達到試驗要求，說明此方法適用范圍較廣。

　　所以，我們認(rèn)為本法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，樣品溶液穩(wěn)定，可作為阿奇霉素干混懸劑含量測定方法之一。

　　參 考 文 獻

　　[1]李榮凌，張先洲.阿奇霉素臨床應(yīng)用分析.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志2006年第26卷第9期

　　[2]張曄.高效液相色譜法測定阿奇霉素片的含量.中國藥業(yè)2006年第15卷第17期

　　[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].北京.化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄ⅪA

　　[4]The United States Pharmacopeial Convention.USP29-NF24 Page227

　　[5]International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2A: Guideline on Validation of Analytical Procedures: Definitions and Terminology [FDA, March 1, 1995 (60 FR 11259)]

　　[6]International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2B: Guideline on the Validation of Analytical Procedures: Methodology [FDA, May 19, 1997 (62 FR 27463)].