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紫外分光光度法測定劍麻花中總黃酮的含量

黃酮類化合物是自然界中很重要的一大類天然有機(jī)化合物，廣泛存在于藥用植物、水果和蔬菜中，特別是在高等植物的花，葉，根中較多^[1]，其生理作用廣泛：不僅對心血管系統(tǒng) 消化系統(tǒng)有作用，且具有抗炎、抗菌及抗病毒、解痙等作用^[2]，是重要的功能食品添加劑，天然的抗氧化劑，天然色素，天然甜味劑等^[3]。

劍麻所屬百合科，為單子葉、旱生、肉質(zhì)、多年生一稔草本植物。開花時(shí)大型圓錐花序生莖頂，花綠色，主莖可達(dá)5 m 以上^[4]。由于劍麻葉片內(nèi)含豐富的纖維，是纖維工業(yè)的重要原料，所以對其研究一直集中在纖維方面，對于劍麻花的研究未見報(bào)道。隨著化學(xué)纖維的發(fā)展，劍麻纖維工業(yè)受到一定的沖擊，為了更好的綜合開發(fā)利用劍麻資源，本文對劍麻花中的總黃酮含量進(jìn)行測定，旨在為劍麻花的研究和開發(fā)提供理論依據(jù)及檢測手段。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

UV- 2550型紫外分光光度計(jì) 日本島津公司；KQ 5200B型超聲波清洗器  昆山超聲儀器有限公司，DHG-9240A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱  上海一恒科技有限公司

    甲醇為分析純：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購于中國藥品生物制品鑒定所；劍麻花 采自淮海工學(xué)院校園內(nèi)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

    準(zhǔn)確稱取10 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容100 mL得濃度為100 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用時(shí)稀釋。

1.2.2 樣品溶液的制備

    準(zhǔn)確稱取粉碎干燥的劍麻花 2.0000 g 用45ml 甲醇浸泡16 h 超聲震蕩40 min過濾,重復(fù)洗滌沉淀3次合并濾液，并定容至50 mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品的定性分析

    為了充分證實(shí)提取物是黃酮類化合物，我們用2種方法進(jìn)行了定性實(shí)驗(yàn)

    a.顯色反應(yīng)^[5] 取劍麻花提取液 2m; 加鎂粉少量鹽酸34滴，呈橙紅色

b.具有紫外光譜特征峰: 黃酮類化合物在200~400nm區(qū)域內(nèi)存在2個(gè)主要吸收峰^[6]：峰帶I 300~400nm 和峰帶II 220~280nm。將提取液用紫外分光光度計(jì)在紫外區(qū)測定，258 nm 和360 nm處有特征峰，見圖 1。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，劍麻花中的提取物是黃酮類化合物。

2.2 測定波長的選擇

    將標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液以甲醇為空白對照，在200~500 nm 進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液在258 nm 處有最大吸收(圖1) 故選定258 nm為測定波長。

2.3 總黃酮提取條件的確定

    選擇浸泡時(shí)間(8、16、24h) 甲醇用量(15、30、45ml)和超聲震蕩時(shí)間(20、40、60min)進(jìn)行了3 因素3水平正交試驗(yàn)，確定提取劍麻花中黃酮的最佳條件，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取的最佳條件為45 ml甲醇浸泡16 h 后超聲震蕩 40 min。將濾渣按最佳提取條件做二次提取，然后

在選定的測定條件下進(jìn)行測定，結(jié)果在258 nm處無吸收，證明本法所選的提取條件已將黃酮提取完全。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml 分別置于10ml 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，以甲醇為空白對照，于258 nm處測定吸光度以吸光度值(A)對濃度(c)作圖，結(jié)果表明，蘆丁濃度在1.0030 g/ml 范圍內(nèi)與吸光度呈線性關(guān)系，回歸方程為A=0.052c +0.0292 r =0.9997。

2.5 回收率試驗(yàn)

分別移取2.5ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.5ml 劍麻花提取液于25 ml容量瓶中，各5 份，用甲醇稀釋至刻度，搖勻測定吸光度，計(jì)算的回收率結(jié)果見表。

2.6 樣品分析

精密吸取提取液0.2ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀至刻度，按上述測定方法連續(xù)測定5次，計(jì)算樣品中總黃酮含量和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果顯示劍麻花中總黃酮含量為 1.56% ，RSD為0.07% ，表明本法具有良好的重現(xiàn)性。

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)，采用紫外分光光度法測定劍麻花中的總黃酮含量，其加標(biāo)回收率和重現(xiàn)性均較好，可作為劍麻花總黃酮含量測定的方法。